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                        如何鋪出均勻的細胞培養板?
                      4. 發布日期:2023-11-20      瀏覽次數:320
                        • 細胞居中和細胞邊緣化

                          從經濟和高效的角度來說,需要根據實驗目的選擇不同規格的培養板。如在進行藥物對待測細胞半抑制率(IC50)測試時,通常使用96孔板,一方面可以設置濃度梯度;另外還可一次性測多個藥物,減少實驗誤差。

                           

                          收集細胞要混勻

                          消化后的細胞一定要充分混勻,要把聚在一起的細胞團充分地吹打開,最好是單個的狀態,但同時又不能損傷細胞,可以用玻璃吸管的移液器操作。離心也很有講究,一般用1000 rpm/min即可。離心力太大細胞容易抱團,然后懸浮離心后的細胞團時,先不要把所有液體都加進,一般先加2mL液體,然后用1mL移液器輕輕將細胞吹起,細胞要像云霧一樣散開,這樣易于形成單細胞。

                           

                          鋪6孔板,12孔板或24孔板,先在每個孔里面加1mL的培養基,晃動使之鋪勻整個孔底,然后加入1 mL的細胞懸液。從孔的左邊靠近底部慢慢加入,這樣細胞懸液會平鋪在整個孔底,細胞分散較均勻,注意加完細胞懸液后要放工作臺靜置一下。這里又有一個竅門,放在顯微鏡的載物臺上面。因為顯微鏡的載物臺是水平校正過的,比什么桌面、超凈臺什么的要平多了。在載物臺上放置20-30分鐘,細胞不差這一會溫度和二氧化碳的,等細胞貼壁了,輕輕移入到孵箱中。
                          鋪96孔板,我每孔是加100微升細胞懸液,加完半邊板48孔后,將剩下的未加的細胞懸液再混一下,再繼續加剩余的半邊板子,都加完后蓋上蓋子,左手輕輕扶住板的左邊,右手輕輕敲擊板的右邊緣,注意把握力度,敲三次即可,太大力或次數太多會導致細胞集中成堆。


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