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                        CCK8細胞實驗
                      4. 發布日期:2023-07-04      瀏覽次數:694
                        • 實驗一:細胞增殖分析

                          1)制備細胞懸液,計數。
                          2)在96孔板中接種細胞懸液,每孔約100μl,同樣的樣本可做3個重復。
                          3)將培養板放入培養箱中預培養一段時間(37℃, 5%CO2),細胞貼壁需要大約2-4h,如果是懸浮細胞,該步驟可以省去。
                          4)每孔各加入10μl CCK-8溶液,由于加入的CCK-8量比較少,可能會因試劑沾在孔壁上而帶來誤差,建議在加完試劑后輕輕晃動培養板以幫助混勻,或者直接配置含10%CCK-8的培養基,以換液的形式加入。另外注意,加樣的過程中盡量不要產生氣泡。
                          5)將培養板放入培養箱中孵育1-4h。因為細胞種類不同,形成的formazan的量也不一樣,所以如果顯色不夠的話,可以延長培養時間,特別是血液細胞形成的formazan很少,需要較長的顯色時間(5-6h)。
                          6)酶標儀測定450nm處的吸光值(OD)。
                          7)若暫時不測定OD值,可以在各孔中加入10μl 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,室溫下避光保存,這樣可以保證OD值在24h內不發生變化。


                          實驗二:細胞毒性分析

                          1)制備細胞懸液,計數。
                          2)在96孔板中接種細胞懸液,每孔約100μl,同樣的樣本可做3個重復。
                          3)將培養板放入培養箱中預培養一段時間(37℃, 5%CO2),細胞貼壁需要大約2-4h,如果是懸浮細胞,該步驟可以省去。
                          4)向培養板各孔中加入不同濃度的毒性物質(藥物、化學試劑等待檢測物質)。
                          5)將培養板放入培養箱中孵育一段時間,例如6、12、24、48h,具體時間要看待測物質的性質和細胞的敏感性。
                          如果待檢測物質有氧化性或還原性,可在加入CCK-8之前更換新鮮培養基,以去掉待測物質的影響。如果影響比較小或者沒有影響,可以不更換培養基,直接扣除培養基中加入藥物后的空白吸收即可。
                          6)向每孔中加入10μl CCK-8溶液,由于加入的CCK-8量比較少,可能會因試劑沾在孔壁上而帶來誤差,建議在加完試劑后輕輕晃動培養板以幫助混勻,或者直接配置含10%CCK-8的培養基,以換液的形式加入。另外注意,加樣的過程中盡量不要產生氣泡,以免影響OD值讀數。
                          7)將培養板放入培養箱中孵育1-4h。因為細胞種類不同,形成的formazan的量也不一樣,所以如果顯色不夠的話,可以延長培養時間,特別是血液細胞形成的formazan很少,需要較長的顯色時間(5-6h)。
                          8)用酶標儀測定450nm處的吸光度(OD)。
                          9)若暫時不測定OD值,可以在各孔中加入10μl 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,室溫避光保存,這樣可以保證OD值24h內不發生變化。

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